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Obtenção e caracterização bioquímica da metacaspase-3 de Trypanosoma cruzi
(Universidade de Mogi das Cruzes, 2025-02-14) Duarte, Ane Caroline Moreira; Machado, Mauricio Ferreira Marcondes
As metacaspases são uma classe de proteases encontradas em organismos como plantas, fungos e protozoários. No contexto do parasita Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas, dois genes de metacaspase foram identificados: TcMCA-3 e TcMCA-5. O genoma haploide de T. cruzi contém aproximadamente 16 cópias da metacaspase-3 de Trypanosoma cruzi (TcMCA-Ic). O presente trabalho investiga a TcMCA-Ic, destacando seu autoprocessamento proteolítico e as condições que afetam sua atividade enzimática. O primeiro capítulo demonstra que a TcMCA-Ic sofre mais de um evento de autoprocessamento dependente de cálcio, gerando múltiplas isoformas, o que sugere um mecanismo regulatório importante para sua função. Análises de expressão e purificação confirmaram a integridade da proteína e confirmaram a influência essencial do cálcio no autoprocessamento. No segundo capítulo, foram estabelecidas as condições ideais de temperatura, pH e concentração iônica para a atividade da TcMCA-Ic, evidenciando que a enzima é otimizada a 25°C e pH 8,5. Além disso, níveis adequados de cálcio aumentam a atividade enzimática, enquanto concentrações excessivas podem induzir autodegradação. Dados de fluorescência intrínseca revelaram uma constante de dissociação de interação ao cálcio, associada a alterações conformacionais irreversíveis na estrutura da proteína. Futuras investigações se concentrarão em caracterizar a especificidade de clivagem da TcMCA-Ic.
Identificação de oncometabólitos salivares em pacientes fumantes de narguilé e cigarro convencional
(Universidade de Mogi das Cruzes, 2025-02-14) Theodoro, Lurye Silva; Alves, Monica Ghislaine Oliveira
O estudo teve como objetivo estabelecer uma correlação entre os oncometabólitos salivares, dados clínicos e a quantificação de cotinina salivar em pacientes com o hábito de fumar narguilé, cigarros industrializados e em não fumantes, na tentativa de observar relação entre as características clínicas e os achados metabólicos. O estudo incluiu 26 fumantes frequentes e exclusivos de cigarros industrializados no grupo do cigarro, 33 fumantes frequentes e exclusivos de narguilé, enquanto o grupo de controle foi composto por 30 indivíduos não fumantes. A saliva total não estimulada foi recolhida para análise. Os dados do perfil metabólico foram obtidos por cromatografia gasosa acoplada a um espectrómetro de massas, e as correlações foram feitas com os níveis de cotinina medidos por teste imunoenzimático (ELISA), bem como com os dados clínicos através de análise estatística na plataforma MetaboAnalyst 6.0. Foi utilizada a opção de análise estatística, formato dos dados em colunas e tipo em picos de intensidade. O processamento foi analisado no modelo linear, e o seu resultado foi representado pelo gráfico Volcano. Foram considerados apenas os metabólitos presentes no 2º quadrante superior, devido ao seu maior grau de relevância em relação ao menor valor de p (p ≤ 0,05), correlacionando com os dados clínicos e o consumo de tabaco entre os fumantes. Notavelmente, o ácido lático, a fucose, a sarcosina, a prolina e o gliceraldeído destacaram-se pelas suas propriedades como biomarcadores oncológicos, oncometabólitos e propriedades mutagênicas.