Obtenção e caracterização bioquímica da metacaspase-3 de Trypanosoma cruzi

Abstract

As metacaspases são uma classe de proteases encontradas em organismos como plantas, fungos e protozoários. No contexto do parasita Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas, dois genes de metacaspase foram identificados: TcMCA-3 e TcMCA-5. O genoma haploide de T. cruzi contém aproximadamente 16 cópias da metacaspase-3 de Trypanosoma cruzi (TcMCA-Ic). O presente trabalho investiga a TcMCA-Ic, destacando seu autoprocessamento proteolítico e as condições que afetam sua atividade enzimática. O primeiro capítulo demonstra que a TcMCA-Ic sofre mais de um evento de autoprocessamento dependente de cálcio, gerando múltiplas isoformas, o que sugere um mecanismo regulatório importante para sua função. Análises de expressão e purificação confirmaram a integridade da proteína e confirmaram a influência essencial do cálcio no autoprocessamento. No segundo capítulo, foram estabelecidas as condições ideais de temperatura, pH e concentração iônica para a atividade da TcMCA-Ic, evidenciando que a enzima é otimizada a 25°C e pH 8,5. Além disso, níveis adequados de cálcio aumentam a atividade enzimática, enquanto concentrações excessivas podem induzir autodegradação. Dados de fluorescência intrínseca revelaram uma constante de dissociação de interação ao cálcio, associada a alterações conformacionais irreversíveis na estrutura da proteína. Futuras investigações se concentrarão em caracterizar a especificidade de clivagem da TcMCA-Ic.